酶标仪使用方法
酶标仪96孔板可以重复使用吗?
酶标仪96孔板可以重复使用吗?
不可以的,实验室用的晶安生物不可以重复使用。
cck8详细实验步骤?
方法/步骤分步阅读
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先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞到培养板内。
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按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每个浓度建议3-6个复孔。
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接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。)
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在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养一段时间(37℃,5% CO2),向每孔加入10 μL CCK溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数),将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
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用酶标仪测定在450nm处的吸光度。若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。
总结:
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1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。
2、按比例 ( 例如:1/2比例 ) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度。
3、建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。
注意事项
如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK之前更换新鲜培养基。
当然yao物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入yao物后的空白吸收即可。OD指数是什么意思?
OD值是光密度的缩写,也可以称为吸光度。吸光度指的是利用物质特有的吸收光谱,来鉴别物质或者测定物质的含量,也就是将一束特定波长的光通过被检测物,被检测物可以将光吸收掉一部分,通过吸光度计算被检测物的浓度。一般被检测物浓度越高,吸光度的值就会越高。临床使用这种分光光度法来检测很多物质,比如可以检测乙肝表面抗原这种蛋白质。